- Studio comparativo in vitro dei meccanismi di sopravvivenza di M.bovis e M.avium subsp. paratuberculosis. Valutazione precoce, ai fini diagnostici, dei profili di espressione proteica di macrofagi infettati sperimentalmente
- In vitro comparative study of the survival mechanisms of M.bovis and M.avium subsp. paratuberculosis. Early evaluation, for diagnostic purposes, of protein expression profiles of experimentally infected macrophages "
- Amato, Benedetta <1984>
Subject
- VET/05 Malattie infettive degli animali domestici
Description
- La tubercolosi bovina e la paratubercolosi sono due patologie che costituiscono un importante minaccia per la salute umana ed animale. Il presente lavoro si basa sullo studio dei prodotti proteici e dei profili di espressione genica di macrofagi di specie bovina e caprina infettati con ceppi di M.bovis e M.paratuberculosis a differenti concentrazioni. Lo scopo è quello di individuare potenziali biomarkers da utilizzare a scopo diagnostico e chiarire le fasi patogenetiche precoci relative all’interazione macrofago-micobatterio. A tal proposito sono stati standardizzati due protocolli di prelievo e messa a punto della coltura macrofagica successivamente infettata con ceppi di campo (singolarmente o in forma mista) di M.bovis and M.paratuberculosis a differenti molteplicità di infezione stabilite secondo diluizioni scalari. Il surnatante ed il pacchetto cellulare venivano prelevati a distanza di 24 h, 48 h ed 1 settimana e sottoposti al saggio ELISA ed alla RT-PCR. I risultati ottenuti hanno evidenziato un aumento dell’IL-6 nei macrofagi bovini infettati con M.bovis e sono stato confermati da ulteriori analisi condotte su campioni di siero di animali naturalmente infetti. Inoltre è stata osservata un’azione modulante della risposta infiammatoria in caso di compresenza di entrambi i patogeni ed un’inibizione del trascritto del TNFα come meccanismo di sopravvivenza dei micobatteri nella specie bovina. E’ stata inoltre riscontrata un’inibizione nella produzione dell’IL-10 nella specie bovina che viceversa non si evidenziava nell’infezione paratubercolare della specie caprina. Quest’ultima non ha rivelato alcuna produzione citochinica in risposta ad entrambi i micobatteri tuttavia risultava evidente l’aumento dell’espressione genica per l’IFN-γ. In aggiunta è stata registrata la produzione di IL-2 in entrambe le specie. In conclusione è stata identificata una profonda variabilità della risposta macrofagica ad entrambe le infezioni (nella loro forma singola o mista) legata alla specie animale, alla concentrazione dei micobatteri ed, infine, nel caso di M.bovis, a ceppi differenti.
- Bovine tuberculosis and paratuberculosis pose an important threat to human and animal health. The present work is based on the study of protein products and gene expression profiles of bovine and caprine macrophages infected with M.bovis and M.paratuberculosis strains at different concentrations. The aim is to identify potential biomarkers that could be used for diagnostic purposes and to clarify the early pathogenic phases related to macrophage-mycobacterium interaction. In this regard, two protocols for the collection and development of macrophage cultures subsequently infected with field strains (singly or in mixed form) of M.bovis and M.paratuberculosis have been standardized to different multiplicity of infection established according to scalar dilutions. Supernatant and pellet were collected at different times (24 h, 48 h and 1 week) and subjected to the ELISA and RT-PCR assays. The results showed an early and constant increase of IL-6 in the bovine macrophages infected with M.bovis. The same result was obtained analyzing serum samples of naturally infected animals. Furthermore, a modulating action of the inflammatory response was observed in case of co-presence of both mycobacteria and an inhibition of the TNFα transcript as survival mechanism of mycobacteria in the bovine species was observed. An inhibition has been found in the production of IL-10 in the bovine species, which vice versa does not appeared in paratubercular infection of the goat species. This species did not reveal any cytokine production in response to both mycobacteria while the genetic expression for the IFN-γ seems increased. The production of IL-2 in both species was also recorded. In conclusion, a profound variability of the macrophage response to both infections (single or mixed form) related to to the animal species, to the concentration of mycobacteria and, finally, in the case of M.bovis, to different strains was identified.
Date
- 2018-05-09
Type
- Doctoral Thesis
- PeerReviewed
Format
- application/pdf
Identifier
urn:nbn:it:unibo-23454
Amato, Benedetta (2018) Studio comparativo in vitro dei meccanismi di sopravvivenza di M.bovis e M.avium subsp. paratuberculosis. Valutazione precoce, ai fini diagnostici, dei profili di espressione proteica di macrofagi infettati sperimentalmente, [Dissertation thesis], Alma Mater Studiorum Università di Bologna. Dottorato di ricerca in Scienze veterinarie