- Vibriosi da Vibrio harveyi: studi di eziopatogenesi e di efficacia vaccinale nel branzino (Dicentrarchus labrax)
- Vibriosis caused by Vibrio harveyi: studies on etiopathogenesis and vaccine efficacy in European sea bass (Dicentrarchus labrax)
- Pretto, Tobia <1985>
Subject
- VET/06 Parassitologia e malattie parassitarie degli animali
Description
- Vibrio harveyi rappresenta un patogeno batterico emergente per l’acquacoltura marina a livello globale. Nel branzino V. harveyi è stato isolato in episodi di mortalità caratterizzati da atassia natatoria, lesioni cutanee ed enteriche. Un protocollo polifasico di identificazione per V. harveyi è stato standardizzato basandosi su metodi biochimici, molecolari e proteomici ed è stato valutato raffrontando una collezione di 81 isolati di campo di V. harveyi (specie ittiche e bivalvi) con ceppi di referenza di V. harveyi e di altre 22 specie della famiglia Vibrionaceae. La valutazione fenotipica si è basata su prove in macrometodo, micrometodo (API20E) e crescita su terreni TCBS e CHROMagar Vibrio. L’analisi molecolare ha impiegato il sequenziamento del gene housekeeping pyrH, e l’amplificazione specie-specifica del gene toxR. Il profilo proteico è stato determinato mediante MALDI-TOF analizzando il contenuto proteico ribosomiale. E’ stato valutato il profilo di sensibilità/resistenza agli antibiotici su 51 ceppi di V. harveyi, isolati da episodi clinici o da campioni ambientali, mediante metodo Kirby-Bauer e determinazione della minima concentrazione inibente (MIC). È stata indagata mediante infezioni sperimentali (immersione e inoculo intraperitoneale IP) la patogenicità di differenti isolati di V. harveyi in branzino valutando le lesioni anatomo-istopatologiche indotte. È stato inoltre sviluppato un protocollo vaccinale basato su vaccino spento polivalente da somministrare per immersione o per inoculo IP, addizionato con estratto extracellulare ed emulsionato o meno con adjuvante. Sono state condotte prove di sicurezza ed efficacia vaccinale determinando per i vari protocolli la percentuale relativa di sopravvivenza (RPS). Un metodo ELISA indiretto è stato sviluppato per comparare la risposta immunitaria (IgM sieriche) degli esemplari vaccinati con i differenti protocolli, evidenziando una risposta significativamente maggiore nei soggetti inoculati IP con vaccino adjuvato.
- Vibrio harveyi is an emerging bacterial pathogen for marine aquaculture globally. In the European sea bass V. harveyi has been isolated in episodes of mortality characterized by ataxia, cutaneous and enteric lesions. In the present study, a polyphasic identification protocol for V. harveyi was standardized based on biochemical, molecular and proteomic methods and was evaluated by comparing a collection of 81 V. harveyi field isolates (fish and bivalve species) with V. harveyi reference strains and other 22 species of the family Vibrionaceae. The phenotypic evaluation was based on macromethod and micromethod (API20E) tests and growth on TCBS and CHROMagar Vibrio. Molecular analysis employed the sequencing of the housekeeping pyrH gene, and the species-specific amplification of the toxR gene. The protein profile was determined by MALDI-TOF analyzing the ribosomal protein content. The antibiotic susceptibility profile was evaluated on 51 V. harveyi strains, isolated from clinical episodes or environmental samples, applying the Kirby-Bauer method and determination of the minimum inhibitory concentration (MIC). The pathogenicity of different V. harveyi isolates in sea bass was investigated by experimental infections (immersion and intraperitoneal IP injection) and the induced anatomo-histopathological lesions were evaluated. A vaccine protocol based on a polyvalent bacterin was also developed to be administered by immersion or by IP, enriched with extracellular extract and emulsified or not with adjuvant. Safety tests and vaccine efficacy were carried out by determining the relative survival rate (RPS) for the various protocols. An indirect ELISA method was developed to compare the immune response (serum IgM) of the specimens vaccinated with the different protocols, highlighting a significantly greater response in the specimens inoculated IP with adjuvant vaccine.
Date
- 2018-05-09
Type
- Doctoral Thesis
- PeerReviewed
Format
- application/pdf
Identifier
urn:nbn:it:unibo-23896
Pretto, Tobia (2018) Vibriosi da Vibrio harveyi: studi di eziopatogenesi e di efficacia vaccinale nel branzino (Dicentrarchus labrax), [Dissertation thesis], Alma Mater Studiorum Università di Bologna. Dottorato di ricerca in Scienze veterinarie